由全球上市的iPS细胞企业呈献的高纯度外泌体。
＊本产品非药品，为试剂。
什么是iPS细胞
iPS细胞（induced Pluripotent Stem Cells），即人工多能干细胞，是一种能够分化成身体各种组织和器官细胞的人工干细胞。由于其能够分化为多种细胞的能力，因此也被称为“万能细胞”。
2006年，日本京都大学的山中伸弥教授首次报告了iPS细胞的制备方法。凭借此项成就，山中教授于2012年荣获诺贝尔生理学或医学奖。
iPS细胞是通过将被称为“山中因子”的基因导入我们身边常见的细胞中，例如皮肤、血液或尿液细胞，并使其表达而制成的（该过程称为“重编程”）。
基因导入的方法有多种，包括病毒、质粒和mRNA等，其中使用mRNA的方法被认为在理论上对iPS细胞染色体的影响最小。
iPS细胞的两大主要特点是：**高增殖能力**和**分化能力**（分化为神经细胞、心肌细胞、肝细胞等多种细胞的能力）。
凭借这些特点，即使是平时难以增殖的细胞，也可以通过iPS细胞大量制备。
人们期待iPS细胞能有广泛的应用，例如：利用iPS细胞制造因疾病或受伤而丧失的组织和器官细胞，用于移植；或者在研发新药时，利用iPS细胞来测试药物的效果和安全性。
我们的身体细胞在反复分裂的过程中会逐渐老化。
通常，一旦老化的细胞无法恢复年轻。随着年龄增长，您是否注意到伤口愈合得比小时候慢了？这种现象正是细胞老化、逐渐丧失增殖能力所导致的结果。
实际上，在细胞老化过程中，染色体末端的“**端粒**”部分会逐渐变短。
然而，有研究报告指出，从这种已经老化且端粒变短的细胞中制备出iPS细胞后，端粒会重新变长，细胞会恢复到老化前的状态。
iPS细胞是一种将人体细胞的时钟“拨回”，使其“返老还童”到初期胚※水平（即“重编程”）的细胞。
※初期胚…受精卵通过反复分裂，逐渐形成人形。初期胚指的就是这种分裂的极早期阶段。
REPROCELL公司的iPS细胞制备（重编程）技术
自2007年iPS细胞被发明以来，其制备方法（重编程方法）一直在持续改进。iPS细胞刚发明时，重编程方法使用的是逆转录病毒载体（源自逆转录病毒的外来DNA）。然而，由于外来基因再活化可能导致癌症的风险，人们开始避免使用病毒载体。
目前，主要的重编程方法有三种。
第一种是使用**游离型载体**（外源环状DNA）的方法。由于使用DNA作为导入因子，有报告指出难以完全排除其整合到染色体中的可能性。※2
第二种是使用**仙台病毒载体**（源自仙台病毒的外来DNA）的方法，这种方法虽然避免了癌症发生的风险，但有报告指出外来DNA会长期残留在细胞中。※3
第三种是目前被认为最适合用于制备临床用iPS细胞的**“mRNA重编程法”**。mRNA进入细胞后，不会进入细胞核内，在完成其使命后会迅速被分解。因此，使用此方法制备iPS细胞，无需担心导入因子的残留或染色体稳定性问题。
REPROCELL公司多年来一直致力于mRNA重编程法的研发。
上图为本公司iPS细胞制备方法——mRNA重编程法的说明。
mRNA进入细胞后，会被翻译成蛋白质，使细胞转变为iPS细胞。由于mRNA无法进入细胞核，因此核内的DNA不会受到损伤。不需要的mRNA会立即被分解，制成的iPS细胞中不会残留导入的mRNA，从而保持了高质量状态。
2025年2月，美国Gameto公司使用ReproCELL提供的临床级iPS细胞，其卵子体外成熟技术“Fertilo”获得了美国食品药品监督管理局（FDA）的III期临床试验IND（新药临床试验申请）批准。这是利用本公司iPS细胞的疗法在美国首次获准进入临床试验，是一项具有里程碑意义的成果，再次证明了本公司细胞的高安全性和高质量。
通过Gameto公司此次获得的FDA IND批准，该公司有望在美国将利用iPS细胞的疗法“Fertilo”首次推进至III期临床试验。我们认为，这再次证明了ReproCELL公司多年积累的临床iPS细胞技术的高安全性和高质量，将为全球范围内的再生医疗和生殖医疗创新做出贡献。
新闻详情请点击此处
※2…Okita K, Matsumura Y, Sato Y, Okada A, Morizane A, Okamoto S, Hong H, Nakagawa M, Tanabe K, Tezuka K, Shibata T, Kunisada T, Takahashi M, Takahashi J, Saji H, Yamanaka S. A more efficient method to generate integration-free human iPS cells. Nat Methods. 2011 May;8(5):409-12.
※3…Agu CA, Soares FA, Alderton A, Patel M, Ansari R, Patel S, Forrest S, Yang F, Lineham J, Vallier L, Kirton CM. Successful Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cell Lines from Blood Samples Held at Room Temperature for up to 48 hr. Stem Cell Reports. 20115 Oct 13;5(4):660-71.
什么是外泌体
细胞会分泌各种大小的物质。在细胞分泌的50nm-5000nm细胞外囊泡中，直径为50-150nm的被称为**外泌体**（Exosome）。它由与细胞膜相同的双层脂质膜构成，内部包含的物质多种多样，包括蛋白质和核酸（DNA、RNA）等。
蛋白质包括整合素、MHC、四跨膜蛋白等膜蛋白，以及热休克蛋白和细胞骨架。主要的核酸包括DNA、mRNA和miRNA。
这些携带特定物质的外泌体从细胞分泌后，在体内通过体液运输。被运送的外泌体会被其他细胞吸收，其内部的蛋白质和核酸在这些细胞内发挥作用，从而实现细胞间的通讯。
REPROCELL公司的iPS外泌体
■纯度和浓度
培养上清液是培养细胞后获得的澄清液体。这种培养上清液中包含培养细胞所需的培养基以及细胞分泌的各种物质，而外泌体就是这些细胞分泌物中的一种。培养基中含有用于帮助细胞增殖和功能的添加剂，例如bFGF（碱性成纤维细胞生长因子）、血清（如牛胎儿血清）和胰岛素等。此外，细胞分泌物中除了外泌体，还混杂有细胞因子、生长因子、各种蛋白质和代谢产物等。
市场上常有将培养上清液直接称为“外泌体”的情况，但严格来说，培养上清液是一种包含外泌体和多种其他成分的复合液体，而外泌体只是培养上清液中极小的一部分成分。
REPROCELL公司的iPS外泌体经过多次纯化，去除了外泌体以外的成分。在此基础上进一步进行浓缩，从而实现了高浓度的外泌体产品。
事实上，通过对ReproCELL公司的iPS外泌体所含成分进行验证，确认到培养基中添加的部分成分已降至检测限以下（见左下图）。
此外，对产品中所含物质的平均尺寸进行分析，确认到其中包含大量50-150nm的成分（见右下图）。
■蛋白质组学分析
外泌体呈胶囊状结构，内部包含核酸和蛋白质等多种物质。
对REPROCELL公司的iPS外泌体中所含因子进行分析后，发现了多种多样的因子，包括具有抗炎作用、抑制细胞凋亡（细胞死亡）以及与DNA修复相关的因子。
符合日美欧GMP标准的iPS外泌体生产
REPROCELL公司在生产外泌体的所有环节都进行了彻底的质量管理。
■ 在符合GMP标准的设施中生产
细胞培养环境有多种，例如研究室（实验室）和洁净室等。
通常所说的研究室并不是用于生产产品的房间，因此对其洁净度和操作步骤没有严格要求。而洁净室通常是独立的房间，但并非获得了国家许可用于细胞生产的设施。因此，仅有洁净室不足以用于生产临床细胞产品。
与此不同的是，REPROCELL公司的生产设施符合GMP标准。该设施专为生产再生医疗用细胞产品而设立，对洁净度、管理方法和生产步骤都有严格的规定。与普通洁净室不同，该设施会进行例如空气中微粒数和附着菌数的监测、频繁的清扫、定期的设施和设备检查、只允许经过培训的人员进行操作以及严格遵守规定的操作程序等。
■ 仅使用通过日美欧三地严格标准的供体细胞
REPROCELL公司的外泌体生产使用的是符合日美欧三地法规的iPS细胞。
为了准备这些细胞，首先需要对细胞供体进行严格的检查。这是为了防止细胞供体本身携带病毒或细菌，从而污染细胞产品的风险。
日美欧三地指定的传染病各不相同，要满足所有标准，需要进行多种类的多次检测。
REPROCELL公司仅使用通过了这些严格标准的iPS细胞来生产外泌体。
不含病毒、不导入基因的下一代iPS细胞
通常，iPS细胞是通过基因导入法或病毒法，将重编程因子导入体细胞中来制备的。这些方法存在体细胞原有基因被改变或病毒残留的风险。
例如，如果iPS细胞内残留病毒，培养上清液中也可能混入病毒。
REPROCELL公司的iPS细胞使用基于RNA的下一代iPS细胞建立方法，不存在基因重组风险，也没有病毒残留风险。因此，ReproCELL公司的iPS外泌体使用的是安全系数很高的iPS细胞。
产品规格
| 品名 | iPSC Purified Exosome |
| 品号 | RCEV002 |
| 容量 | 2mL |
| 溶剂 | 生理盐水 |
iPS外泌体的特点【论文信息】
■ 减少老化成纤维细胞的老化标志物（文献1）
细胞在反复培养后会逐渐老化并停止增殖。在细胞实验中，老化的成纤维细胞（皮肤细胞）可以通过老化标志物（β-gal）进行检测。然而，有报告（文献1）指出，向老化成纤维细胞中添加iPS外泌体，可以减少细胞的老化标志物。
■ 维持成纤维细胞的胶原蛋白生成量（文献1）
通常，成纤维细胞老化后会失去生成胶原蛋白的能力。在细胞实验中，经过反复培养而老化的成纤维细胞同样会失去生成胶原蛋白的能力，但有报告（文献1）指出，向其中添加iPS外泌体可以维持其胶原蛋白的生成量。
■ 降低成纤维细胞的紫外线损伤（文献1）
通常，成纤维细胞在受到紫外线照射后，会因损伤而数量减少。在细胞实验中，照射紫外线48小时后，成纤维细胞数量减少，生成的胶原蛋白量也随之减少。然而，有报告（文献1）指出，向添加了iPS外泌体的成纤维细胞照射同样剂量的紫外线后，细胞数量没有大幅减少，保持了稳定。
■ 维持血管结构（文献2）
众所周知，高血糖等因素导致血管长期暴露在高糖环境中会使其老化。在细胞实验中，若将血管细胞长时间置于高糖培养液中培养，细胞会减少，血管结构也会被破坏。然而，有报告（文献2）指出，向这种细胞中添加iPS外泌体可以维持其血管结构。
■ 维持细胞增殖能力（文献3）
细胞老化后会丧失分裂和增殖的能力，干细胞也不例外，反复培养后会停止增殖。在细胞实验中，有报告（文献3）指出，即使是已经停止增殖的老化干细胞，在加入iPS外泌体后，也能重新开始增殖。在这篇论文中，尽管也对干细胞（MSC）外泌体进行了类似的实验，但iPS外泌体显示出了更优异的结果。
总代理
iPS外泌体由株式会社JTB担任总代理，并通过一般财团法人日本健康开发财团（总部：东京都，以下简称“日本健康开发财团”）进行销售。
引用文献
1. Oh M, et al.,. Int J Mol Sci. 2018;19(6):1715.
2. Ding Q, et al. Exp Ther Med. 2018;15(6):4791-4797.
3. Liu S, et al. Stem Cells. 2019;37(6):779-790.
关于REPROCELL（运营公司）
作为iPS细胞产业的领军者
株式会社ReproCELL 创立于2003年，是源自日本京都大学和东京大学的再生医疗新兴企业。公司于2013年在日本JASDAQ上市，目前在日本、美国、英国、印度设有分支机构，业务遍及全球。
自创立以来，ReproCELL一直致力于iPS细胞的商业化。2007年，京都大学山中教授首次成功培育出人类iPS细胞的实验中，便使用了本公司的培养液。2009年，本公司开始销售世界首个iPS细胞产品——iPS心肌细胞。
截至2024年，本公司的产品已被全球超过9,000篇学术论文引用。自2016年起，公司正式进军再生医疗领域，并积极推进3款再生医疗产品的研发。
展望未来，ReproCELL将继续作为iPS细胞产业的领军者，不断挑战与创新，为再生医疗、医学以及生物技术的发展贡献力量。
- 公司名称／株式会社REPROCELL
- 上市时间／2013年（东京证券交易所 Growth板块，股票代码：4978）
- 成立时间／2003年2月
- 公司地址／〒222-0033 神奈川县横滨市港北区新横滨3-8-11 MetLife新横滨大楼9层
