臨床グレードiPS細胞（日・米・欧規制対応）

臨床グレードiPS細胞作製の概要

リプロセルは、日本、米国、欧州の3拠点にあるグループ会社のノウハウを活用し、PMDA（日本）およびFDA（米国）/EMA（欧州）とのコンサルテーションを通じて、各国（日本、米国、欧州）の規制に対応した臨床グレードiPS細胞を提供しています。適切なドナースクリーニングを行い、得られたソース細胞から、RNAリプログラミング法を用いて、臨床グレードiPS細胞を作製しました。現在は、複数のドナーから複数のiPS細胞株を作製し、臨床グレードiPS細胞株と、それらのiPS細胞株の選定のため、同一クローンを研究用途用に拡大培養した研究評価用のiPS細胞株を提供しています。

臨床グレードiPS細胞株ラインアップ

研究評価用iPS細胞株ラインアップ

研究評価用iPS細胞株は、臨床グレードiPS細胞株を研究グレードの条件で拡大培養後に凍結しています。そのため、研究評価用iPS細胞株は、臨床iPS細胞株と同等の特長を有しており、臨床iPS細胞株を使用する前に、使用目的に最適な株の選定のため（例えば目的細胞への分化傾向の評価など）に、使用いただけます。

臨床グレードiPS細胞株の未分化評価

RNAリプログラミング法で作製されたiPS細胞は、ゲノムへのインテグレーションが起こらず、安全なiPS細胞が得られると知られています。iPS細胞の形態、核型、未分化マーカーの発現等、正常性が確認できています。（記載データは全てVCT-37-F35株）

明視野像と6継代後のG-バンド染色像（右図）

臨床グレードiPS細胞株（VCT-37-F35株）の未分化マーカー（OCT3/4、SSEA-4）の発現量を評価しました。どちらのマーカーも97％以上の細胞で発現がみられ、未分化状態を維持していることが示されました。

臨床グレードiPS細胞株の分化能

三胚葉への分化能（遺伝子発現）

臨床iPS細胞株（VCT-37-F35株）を三胚葉にそれぞれ分化誘導し、各胚葉のマーカー遺伝子（内胚葉：SOX17、FOXA2、中胚葉：GATA４、Brachyury、外胚葉：PAX6、MAP2）の発現をPCRで評価しました。それぞれのマーカー遺伝子の発現が誘導され、三胚葉への分化能を有することが示されました。（未分化iPS細胞の発現を１とする）

●内胚葉（SOX17、FOXA2）

●中胚葉（GATA4、Brachyury）

●外胚葉（PAX6、MAP2）

神経系細胞

臨床グレードiPS細胞（VCT-37-F35株）から、神経幹細胞への分化誘導を行いました。神経幹細胞マーカーであるPAX6、SOX１の発現が確認できています。さらに、これらのiPS細胞から、アストロサイトへの分化誘導を行い、90％以上の細胞がGFAP陽性のアストロサイトへと分化しました。

●神経幹細胞への分化誘導（PAX6、SOX１の発現）

●GRP・アストロサイトへの分化（明視野顕微鏡像、GFAPの発現）

造血系細胞

臨床グレードiPS細胞（VCT-37-F35株）から、造血幹細胞へと分化誘導しました。造血幹細胞マーカーである（CD34、CD43）の両遺伝子の発現を確認しました。さらにNK細胞へ分化誘導を行い、NK細胞の特徴（CD45陽性、CD56 陽性、CD３陰性）を有する細胞が得られました。既存のiPS細胞株と同程度の分化効率を示しました。

●造血幹細胞への分化誘導（CD34、CD45）

造血幹細胞

●NK細胞への分化誘導（CD45、CD56、CD3)

（※東京都医学総合研究所　原孝彦先生からご提供）